COPROCULTIVO

OBJETIVO

− Comprobar mediante coprocultivo la presencia en las heces de los microorganismos cultivables más frecuentes (Salmonella, Shigella y Yersinia) que puedan ser responsables de un proceso infeccioso.

− Diferenciar los microorganismos patógenos de los componentes de la microbiota fecal normal.

− Identificar mediante pruebas bioquímicas los posibles microorganismos patógenos.

FUNDAMENTO TEORICO

El tubo digestivo contiene una abundante microbiota intestinal que parece desempeñar una función beneficiosa para el hombre. Por otra parte, existe una serie de agentes bacterianos infecciosos que pueden afectar el tracto digestivo. Observar las placas para detectar los microorganismos patógenos entre la abundante microbiota fecal e identificarlos. En el agar sangre (medio general) se puede observar la composición de la microbiota fecal normal aerobia. En el resto de los medios (selectivos), lo fundamental es distinguir colonias que no fermentan la lactosa (Salmonella, Shigella, Yersinia) de los coliformes (bacterias que comparten características bioquímicas y tienen importancia como indicadores de contaminación de agua y alimemtos), que habitualmente la fermentan. El caldo de tetrationato permite la detección de los patógenos entéricos cuando están presentes en bajo número, ya que retrasa el desarrollo de los microorganismos de la microbiota normal y favorece el de los patógenos entéricos. Puede ocurrir que en las placas de cultivo no observemos colonias lactosa negativas y, sin embargo, en la resiembra del caldo sí aparezcan. En este caso se procede a identificar los microorganismos patógenos a partir de la resiembra del caldo. Observar el aspecto de las colonias en los medios selectivos. Colonias transparentes en agar McConkey y con un precipitado de color negro en agar S-S y agar HK: altamente indicativas de Salmonella. Colonias grandes, planas, transparentes en los medios selectivos: indicativas de Shigella. Colonias puntiformes y transparentes en los medios selectivos: indicativas de Yersinia.

Pruebas bioquímicas. A partir de cualquier colonia sospechosa lactosa negativa (seleccionada en el punto anterior), picar con un asa de siembra de punta recta y sembrar en slant en KIA e inocular el caldo de  urea. Incubar ambos medios a 37 °C durante 24 horas. 

MATERIAL

* Muestra de heces recogida con hisopo estéril, 

*Asas de siembra de punta redonda 

* Medios de cultivo para aislamiento: Agar sangre, Agar McConkey, Agar Salmonella-Shigella (S-S),  Agar entérico Hektoen (HK) y Caldo de tetrationato.

* Medios de cultivo para pruebas bioquímicas: Caldo de Urea y Kligler Iron Agar (KIA) en slant

PROCEDIMIENTO

1. Sembrar la muestra en las placas siguientes: Agar sangre, Agar McConkey, Agar Salmonella-Shigella (S-S) y Agar Hektoen(HK). Para ello, se extiende el hisopo desde un borde hasta la mitad de la placa. A continuación, con un asa de siembra estéril de punta redonda, se hace un agotamiento por estría en el resto de la placa.

2. Introducir el hisopo en el caldo de tetrationato agitándolo ligeramente (enriquecimiento). Incubar las placas y el caldo a 37 °C durante 24 horas.

3. Al día siguiente, realizar una resiembra del caldo de tetrationato en agar S-S. Sembrar por agotamiento por estría. Incubar a 37ºC durante 24h.